การผลิตกรดไขมันโอเมก้า-3 และการย่อยสลายในกระเพาะหมักของ Recombinant Saccharomyces cerevisiae ที่มียีน Fatty Acid Desaturase 2 (FAD2)

Abstract

วัตถุประสงค์ในการศึกษาครั้งนี้เพื่อผลิต recombinant Saccharomyce cerevisiae ที่มีชิ้นส่วนของยีนที่ถูกคัดแยกมาจาก Saccharomyce kluyveri และประเมินปริมาณกรดไขมันโอเมก้า-3 จาก recombinant S. cerevisiae รวมทั้งประเมินค่าการย่อยสลายในกระเพาะหมักของอาหารหยาบที่ได้รับการเสริม recombinant S. cerevisiae DNA ที่สกัดจาก S. kluyveri นำไปทำปฏิกิริยา PCR amplification โดยใช้ fatty acid desaturase 2 primer (FAD2) ผลผลิต PCR นำไปโคลนโดย pTA2 พลาสมิดเวกเตอร์ แล้วนำเข้าไปยัง S. cerevisiae หลังจากนั้น วิเคราะห์กรดไขมันโดยใช้ Gas chromatography และหาค่าการย่อยสลายในกระเพาะหมักโดยวิธี in vitro gas production technique มีการจัดกลุ่มทดลองด้วยวิธี 3x3 factorial ในแผนการทดลองแบบสุ่มโดยตลอด (CRD) ประกอบด้วย 2 ปัจจัย ปัจจัยที่ 1 คือ ชนิดของอาหารหยาบ ประกอบด้วย หญ้าเนเปียร์หมัก หญ้ากินนีหมัก และ ฟางข้าว ปัจจัยที่ 2 คือ การเสริมยีสต์ ประกอบด้วย กลุ่มควบคุม (C), กลุ่มที่เสริม S. cerevisiae (SC) และกลุ่มที่เสริม recombinant S. cerevisiae ที่มียีน FAD2 จาก S. kluyveri (SCSK) ประกอบด้วย 9 กลุ่มทดลอง ทำการเก็บน้ำจากกระเพาะรูเมนจากโคพืน้ เมืองจำนวน 4 ตัว ทำการวัดปริมาณแก๊ซที่ 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48, 72 และ 96 ชั่วโมง และวัดปริมาณจุลินทรีย์ (microbial biomass yield, MBY) หลังจากการหมักย่อยที่ 24 ชั่วโมง จากการวิเคราะห์กรดไขมัน พบว่า กรดไขมัน Linoleic acid (C18:2, LA), Alphalinolenic acid (C18:3, ALA) และ Eicosapentaenoic acid (C20:5, EPA) ของ recombinant S. cerevisiae มีปริมาณมากกว่า S. cerevisiae อย่างมีนัยสำคัญ สำหรับปริมาณแก๊สสุทธิที่เกิดขึน้ ในชั่วโมงที่ 2-12 ของหญ้าเนเปียร์หมักมีค่าสูงที่สุด ปริมาณแก๊สสุทธิที่ 24 ของอาหารหยาบที่เสริมด้วย recombinant S. cerevisiae จะมีปริมาณแก๊สสุทธิสูงที่สุดสรุปได้ว่า recombinant S. cerevisiae สามารถผลิต LA, ALA และ EPA ได้มากกว่า S. cerevisiae อาหารหยาบที่เสริมด้วย recombinant S. cerevisiae จะมีปริมาณ OMD และ SCFA สูงที่สุด